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不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较 作者： 李吉 1 刘作金 2 作者单位： 1. （1）重庆医科大学第二临床学院，重庆 400016；（2）重庆医科大学附属第二医院肝胆外科，重庆 400010 提交时间： 2017-12-07 摘要: 目的 对比不同的转染试剂转染RIP140-siRNA至肝脏库普弗细胞的转染效率及它们对肝脏库普弗细胞的细胞毒性，从而寻找出最佳的肝脏库普弗细胞试剂转染方法和条件。 方法 以肝脏库普弗细胞为研究对象，以绿色荧光蛋白（GFP）标记的RIP140-siRNA为报告基因（reporter gene），采用lipofectamine 2000，罗氏试剂（X-treme GENE siRNA Transfection Reagent）及嘌呤霉素筛选的慢病毒（1.0×10 8 TU/mL）作为转染试剂，荧光倒置显微镜下观察细胞转染效果，激光扫描共聚焦显微镜分析不同试剂转染后细胞RIP140的表达，流式细胞术检测各组细胞凋亡，CCK-8检测各组细胞增殖抑制情况。收集细胞并进行裂解，提取细胞RNA与蛋白质，运用RT-RCR和Western blot实验法检测转染RIP140-siRNA后的基因及蛋白质表达情况。结果 对于肝脏库普弗细胞而言，在转染效率方面：嘌呤霉素筛选的慢病毒转染效率最高，可达90%以上；罗氏试剂其次；lipofectamine2000效果最差。在试剂的细胞毒性方面：流式细胞术及CCK-8检测结果显示罗氏试剂的细胞毒性最小，细胞可见其原有形态；慢病毒其次；lipofectamine 2000细胞毒性最大，可见多数细胞失去原有形态，并存在细胞裂解状态。RT-RCR和Western blot实验显示慢病毒转染RIP140-siRNA的肝脏库普氏细胞组无论在基因方面还是在蛋白质水平均明显低表达于lipofectamine 2000和罗氏试剂所转染的肝脏库普弗细胞组（P<0.05）。 结论 对于原代细胞肝脏库普弗细胞，在试剂转染方面，慢病毒转染方法可以达到理想的转染效率和较小的细胞毒性，且条件可控性与稳定性方面更加优越。 Abstract: Objective To compare the efficiency and cytotoxicity of different transfection reagents used in transfection of RIP140-siRNA into Kupffer cells to optimize the transfection conditions. Methods Kupffer cells were transfected with RIP140-siRNA labeled with GFP as the reporter gene using lipofectamine 2000, Roche reagent (X-treme GENE siRNA Transfection Reagent) and puro screening lentivirus (1.0�0 8 TU/mL) as the transfection reagents. The transfection effect was observed under a fluorescent inverted microscope, and laser scanning confocal microscopy was used to analyze RIP140 expression in trasnfected Kupffer cells. Flow cytometry was performed to detect cell apoptosis, and CCK-8 test was used to evaluate the cell proliferation inhibition. RT-RCR and Western blotting were performed to detect the expressions of RIP140 mRNA and protein in the trasnfected cells. Results Puro screening lentivirus yielded the highest cell transfection efficiency, which exceeded 90%, followed by Roche reagent and then by lipofectamine 2000. Flow cytometry and CCK-8 test showed that the cytotoxicity was the mildest with Roche reagent, moderate with lentivirus, and severe with lipofectamine 2000. The cells trasnfected with lentivirus showed a significantly lower RIP140 expression than cells trasnfected with lipofectamine 2000 and Roche reagent (P<0.05). Conclusion In Kupffer cells, lentivirus-mediated transfection, as compared with the other two trasnfection reagents, can achieve good transfection efficiency with a relativelty low cytotoxicity, and allows for better controllability and stability of the trasnfectiion conditions. 肝脏库普弗细胞 转染效率 细胞毒性 RIP140-siRNA 分类： 医学、药学 >> 基础医学 引用： ChinaXiv:201712.00709 (或此版本 ChinaXiv:201712.00709V1 ) doi:10.12074/201712.00709 CSTR:32003.36.ChinaXiv.201712.00709.V1 推荐引用方式： 李吉,刘作金.(2017).不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较.南方医科大学学报.[ChinaXiv:201712.00709] 版本历史 [V1] 2017-12-07 16:35:23 ChinaXiv:201712.00709V1 下载全文

我想要挨一顿毒打……” ——灾厄之剑、旧世界守墓人、调律师、最后的天国捍卫者、二十四个毁灭因素之一、淮海路小佩奇、深渊烈日、最终的地狱之王：槐诗。.某一天，穷困 潦倒的槐诗忽然发现自己捡来的金手指终于能用了……只不过，这似乎并不是一件好事。为了赚钱和苟命，他一不小心踏入了这个危险世界。现境之外的边境，日常之后的异常。天文会，绿日、黄金黎明、存世余孽与诸界天敌……究竟是生存还是灭亡？这是个问题。那么，就在这一万零一种拯救世界的方法中，选一个通往HAPPYEND的方向吧。——————读者群：718703105(存续院一号实验室)，入群之后发粉丝值召唤管理，可进入V群。3w0-256 展开全部>>

年龄差?先婚后爱?顶级温柔爹系?双洁】 禁欲心外科医生x成长系甜妹翻译 正文已完结，番外日更连载中，日常向小甜文，不狗血 - 订婚前夕，江乔亲眼看见男友和别人吻得火热。 狼狈之际，裴知鹤高大的身影立于她身侧，金丝边镜片后深邃的黑眸望向她，淡声问：“捉奸，还是跟我走？” 顾不上男人是她未婚夫的哥哥， 被蛊惑般，江乔握上那只修长骨感的手。 几天后，长辈又提起和裴家的婚约。 江乔做了二十多年来最大胆的决定，和裴知鹤闪婚。 - 众人皆知，裴家大少爷裴知鹤光风霁月，生性清冷，年纪轻轻就被加冕为心外科神之手。 圣诞节前的柏林，白雪弥漫。 学术论坛发言时，裴教授无名指上婚戒闪烁，惊掉了所有人的下巴。 一时间全医院都在打赌，这种天之骄子的婚姻不过是逢场作戏。 直到散会后，有人撞见西装笔挺的裴知鹤半跪着给随行的美人翻译系鞋带。 起身时少女佯装要吻他， 裴知鹤喉结滚了滚，眸色滚烫克制： “乖，回房间再闹。” TIPS： 1.女主视角先婚后爱，男主视角蓄谋已久 2.年龄差7，年少时的白月光暗恋我 3.婚后甜甜甜宠宠宠文 您要是觉得《时空穿越者》还不错的话请不要忘记向您QQ群和微博微信里的朋友推荐哦！

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