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不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较 作者： 李吉 1 刘作金 2 作者单位： 1. （1）重庆医科大学第二临床学院，重庆 400016；（2）重庆医科大学附属第二医院肝胆外科，重庆 400010 提交时间： 2017-12-07 摘要: 目的 对比不同的转染试剂转染RIP140-siRNA至肝脏库普弗细胞的转染效率及它们对肝脏库普弗细胞的细胞毒性，从而寻找出最佳的肝脏库普弗细胞试剂转染方法和条件。 方法 以肝脏库普弗细胞为研究对象，以绿色荧光蛋白（GFP）标记的RIP140-siRNA为报告基因（reporter gene），采用lipofectamine 2000，罗氏试剂（X-treme GENE siRNA Transfection Reagent）及嘌呤霉素筛选的慢病毒（1.0×10 8 TU/mL）作为转染试剂，荧光倒置显微镜下观察细胞转染效果，激光扫描共聚焦显微镜分析不同试剂转染后细胞RIP140的表达，流式细胞术检测各组细胞凋亡，CCK-8检测各组细胞增殖抑制情况。收集细胞并进行裂解，提取细胞RNA与蛋白质，运用RT-RCR和Western blot实验法检测转染RIP140-siRNA后的基因及蛋白质表达情况。结果 对于肝脏库普弗细胞而言，在转染效率方面：嘌呤霉素筛选的慢病毒转染效率最高，可达90%以上；罗氏试剂其次；lipofectamine2000效果最差。在试剂的细胞毒性方面：流式细胞术及CCK-8检测结果显示罗氏试剂的细胞毒性最小，细胞可见其原有形态；慢病毒其次；lipofectamine 2000细胞毒性最大，可见多数细胞失去原有形态，并存在细胞裂解状态。RT-RCR和Western blot实验显示慢病毒转染RIP140-siRNA的肝脏库普氏细胞组无论在基因方面还是在蛋白质水平均明显低表达于lipofectamine 2000和罗氏试剂所转染的肝脏库普弗细胞组（P<0.05）。 结论 对于原代细胞肝脏库普弗细胞，在试剂转染方面，慢病毒转染方法可以达到理想的转染效率和较小的细胞毒性，且条件可控性与稳定性方面更加优越。 Abstract: Objective To compare the efficiency and cytotoxicity of different transfection reagents used in transfection of RIP140-siRNA into Kupffer cells to optimize the transfection conditions. Methods Kupffer cells were transfected with RIP140-siRNA labeled with GFP as the reporter gene using lipofectamine 2000, Roche reagent (X-treme GENE siRNA Transfection Reagent) and puro screening lentivirus (1.0�0 8 TU/mL) as the transfection reagents. The transfection effect was observed under a fluorescent inverted microscope, and laser scanning confocal microscopy was used to analyze RIP140 expression in trasnfected Kupffer cells. Flow cytometry was performed to detect cell apoptosis, and CCK-8 test was used to evaluate the cell proliferation inhibition. RT-RCR and Western blotting were performed to detect the expressions of RIP140 mRNA and protein in the trasnfected cells. Results Puro screening lentivirus yielded the highest cell transfection efficiency, which exceeded 90%, followed by Roche reagent and then by lipofectamine 2000. Flow cytometry and CCK-8 test showed that the cytotoxicity was the mildest with Roche reagent, moderate with lentivirus, and severe with lipofectamine 2000. The cells trasnfected with lentivirus showed a significantly lower RIP140 expression than cells trasnfected with lipofectamine 2000 and Roche reagent (P<0.05). Conclusion In Kupffer cells, lentivirus-mediated transfection, as compared with the other two trasnfection reagents, can achieve good transfection efficiency with a relativelty low cytotoxicity, and allows for better controllability and stability of the trasnfectiion conditions. 肝脏库普弗细胞 转染效率 细胞毒性 RIP140-siRNA 分类： 医学、药学 >> 基础医学 引用： ChinaXiv:201712.00709 (或此版本 ChinaXiv:201712.00709V1 ) doi:10.12074/201712.00709 CSTR:32003.36.ChinaXiv.201712.00709.V1 推荐引用方式： 李吉,刘作金.(2017).不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较.南方医科大学学报.[ChinaXiv:201712.00709] 版本历史 [V1] 2017-12-07 16:35:23 ChinaXiv:201712.00709V1 下载全文

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胡周一睁开眼睛，就发现自己无故从修仙界穿到一个胖乎乎的农女身上。开局就把人家和自己脱光光，准备来个霸王硬上弓，感觉整个人还在懵逼中，偏偏敲窗的声音还在响。 老太太：胖丫，行了没？奶去给你叫人了？ 什么行了没？又叫什么人？ 又敲窗。 老太太：咋样了？成了没？ 什么成了没？ 老太太有些懊恼地拍了一下自己的脑壳。 老太太：胖丫，你听奶说，你要…… 窗外，是老太太教自己孙女该怎么洞房的声音。 边上是混身越来越冷，好像下一秒就马上要跳起来杀死她的男人。胡周咽了咽口水，实在太尴尬：奶，奶你别说了。 老太太高兴得眉开眼笑：懂了哈？哎哟喂！我的胖丫就是聪明。 胡周急忙把衣服穿好：奶，你别走，进来帮个忙。 老太太一个踉跄差点没摔倒：啥？这种事奶咋帮你？ ……

评分刚出，后面会涨的。 【双女主，白合，虐文，全是刀，整篇小说都刀，有爱就是为了更好的刀，不喜勿喷】 前期可能有会觉得NC的地方，希望大家理解，后期会填坑的。 被车祸送往异世界的女大学生苏小玖，意外遇到了系统，在系统的告知下，她只需要在凤傲天的追杀下尽最大可能的努力活下去，坚持100次，就可以回到原来的世界，并且能够治好母亲的疾病，在无奈之下，她只能选择同意。 无限重生，是福也是祸，被虐的失去理智，被虐的癫狂的苏小玖彻底堕落，最终在凤傲天面前惨死。 凤傲天夏清，因为女反派苏小玖的使坏，导致了她母亲永远的离世，她发誓，如果有机会一定要让她血债血偿。 可等她有翻身之力的时候，苏小玖却不见了，不过幸好她重生了还有了复仇系统出现了，可她万万想不到的是这个附属系统竟然是个内鬼。 而当苏小玖死亡100次后，她才发现事情的真相。 当一切线索串联起来，她才发现那个真正关心自己的人，再也不会复活了。。。

如果此书侵犯了您的权益，请点击访问作者版权投诉快速通道 一九八三年，十二月三十一日。 北京暴雪。 部队总院的一间特护病房里，一位老人躺在病床上，似是已经陷入昏迷，他的身上插满了各种管子。 医生们焦急的忙碌着。 病房外，黄忆琴眼眶红红的，透过门玻璃忧心忡忡的望着昏迷的父亲。 “忆琴同志，老首长情况好些没有？”一名花甲之年的军装老人步履匆匆走来，问道。 “一直没有苏醒。”黄忆琴的泪水再也止不住，“医生说可能，可能就在这一两天了。” “唉！”江汉明长长的叹了口气。 也就在这个时候，病床上的老人的情况似乎开始恶化，仪器发出尖叫声。 走廊里，老干部局的同志面色忧伤。 “向中央汇报吧，准备后事。” …… 首都机场。 暴雪中，一架航班顽强的落地。 这是一架从日本大阪飞来北京的航班。 众旅客正准备下机，却被广播告知留在座位，不得随意走动，并且要求拉上窗帘，不得随意窥视。 有自认身份不凡的旅客不乐意了，然后一名中山装男子迅速走向此人，向其出示了证件，此人立刻惊恐不已，讷讷不敢言。 也就在此时，头等舱。 一个老人坐在靠窗的座位，因为雾气的原因，他不得不频频擦拭窗玻璃，才能够看清楚。 他贪婪的看着外面，看那银装素裹，看那远端旗杆上高高飘扬的五星红旗！ 在他的身旁，银发苍苍的老妇人依然可见面容精致，她头枕在老伴的身上，手上握紧了老伴的手，低声说道，“千帆，医生说了你不能太激动。” 一队中山装男子走来。 程贲冲着身边的保镖示意，保镖立刻迎上去，对方向其出示了证件。 保镖走回来，对程贲说道，“是侨办的人。” “父亲，母亲。”程贲来到程千帆、白若兰身旁，低声说道，“是侨办的人来接您了。” 程千帆转过头，他看过去，忽而说道，“是侨办的同志吗？” “对，是侨办的。”程贲点点头，心中却是在想着，父亲果然是老了，竟然说错话，对他此前最敌视的红党人用了‘同志’二字。 “程老先生，白女士，我们是侨办的，奉命来接您回家。”侨办的同志上前，弯下腰，轻声说道。 程千帆昏黄的眼眸猛然绽放出惊人的光芒。 回家？ 他看向对面的同志。 面前的同志点点头，“我们来接您回家。” “对，回家，回家。”程千帆的眼眸泛着泪光。 白若兰摸出手帕，帮丈夫擦拭眼角的泪水。 “若兰啊，他们来接我回家了。”程千帆说道。 “晓得，晓得嘞，不要激动，医生说了不要激动。”白若兰担心极了，赶紧说道。 “没事，没事的。”程千帆摆了摆手，“没人能阻止我回家，就是黑白无常、阎王老子来了都不行。” “念华！”程贲冲着还在玩掌中游戏机的小儿子喊道，“过来扶着爷爷奶奶。” 说着，他上前搀扶母亲，看到小儿子来搀扶了爷爷，面色这才缓和。 随行的由十一人组成的保镖团队，以及九人医护人员团队，在侨办工作人员的引领下，浩浩荡荡的下机。 停机坪。 一列年轻英武的解放军战士列队。 鹅毛大雪落下，绿色的军装上披洒了一层洁白。 程千帆与白若兰在孙子、儿子的搀扶下下机。 侨办的同志走到程千帆的身旁，压低声音说道，“程老先生，这些都是从前线下来的，战场上立过功的同志们。” “您的老朋友路大章同志的大孙子也在其中。”他的声音很低，寂静飞舞的雪花中，却是可以听得见。 程千帆看向侨办的同志。 侨办的同志点点头。 程千帆的嘴唇哆嗦着，他对身旁的妻子说道，“若兰，我们回家咯。” 飞机上的乘客，总有不守规矩的。 有人悄悄掀起了窗帘的一角。 然后惊讶的看到： 大雪纷飞的停机坪，站立如松的解放军同志们列队。 一队老夫妇在中年儿子、年轻的孙子的搀扶下，缓缓走着。 一名年轻的军官从队列中出来，他面向远道归家的游子。 “我自己能走。”程千帆示意小孙子不必搀扶，他自己走。 “爸爸？”程念华看向父亲。 程贲本想要再劝说，看到父亲那坚决的神色，只得遵从父亲的意见。 “若兰，你与我一起。”程千帆忽而对妻子说道。 “好，我陪着你，一直陪着你。”白若兰走过来，两位老人互相挽着手臂，向前行。 程千帆看向当先的年轻军官，这军官的面容依稀可见‘飞鱼’同志的影子。 “各就位！”年轻的军官大声喊道，“向归国华侨。” “敬礼！” 白雪皑皑的北京城，高高飘扬的五星红旗，忠诚的国家卫士，向离家三十四年的游子，齐刷刷敬礼。 PS：各位大大，作者谍战新书《人心变了》刚刚已经上架了，为新书求首订，求订阅，上架成绩至关重要，恳求诸位大大支持订阅。 这章《山坡上的圣女》的番外，因为是回家，也算是重大意义，比较圆满的节点了。 所以，我还在犹豫，我还没决定是就此作为番外的结束，还是后面再继续完善一些番外，也愿意听听大家的意见。 喜欢我的谍战岁月请大家收藏：(兰州资源环境职业技术大学)我的谍战岁月新乐文小说更新速度全网最快。

偶然发现怀孕六个月的妻子曾经做过试管婴儿的凭据，果然强行离婚，却发现事情另有蹊跷，幕后黑手竟然是……