766506155
阅读过
7286
打赏
367144
推荐票
57612684
断更
心中有了这个念头，萧玉将全部的注意力都放在了念《七夜强宠》上
小说
不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较 作者： 李吉 1 刘作金 2 作者单位： 1. （1）重庆医科大学第二临床学院，重庆 400016；（2）重庆医科大学附属第二医院肝胆外科，重庆 400010 提交时间： 2017-12-07 摘要: 目的 对比不同的转染试剂转染RIP140-siRNA至肝脏库普弗细胞的转染效率及它们对肝脏库普弗细胞的细胞毒性，从而寻找出最佳的肝脏库普弗细胞试剂转染方法和条件。 方法 以肝脏库普弗细胞为研究对象，以绿色荧光蛋白（GFP）标记的RIP140-siRNA为报告基因（reporter gene），采用lipofectamine 2000，罗氏试剂（X-treme GENE siRNA Transfection Reagent）及嘌呤霉素筛选的慢病毒（1.0×10 8 TU/mL）作为转染试剂，荧光倒置显微镜下观察细胞转染效果，激光扫描共聚焦显微镜分析不同试剂转染后细胞RIP140的表达，流式细胞术检测各组细胞凋亡，CCK-8检测各组细胞增殖抑制情况。收集细胞并进行裂解，提取细胞RNA与蛋白质，运用RT-RCR和Western blot实验法检测转染RIP140-siRNA后的基因及蛋白质表达情况。结果 对于肝脏库普弗细胞而言，在转染效率方面：嘌呤霉素筛选的慢病毒转染效率最高，可达90%以上；罗氏试剂其次；lipofectamine2000效果最差。在试剂的细胞毒性方面：流式细胞术及CCK-8检测结果显示罗氏试剂的细胞毒性最小，细胞可见其原有形态；慢病毒其次；lipofectamine 2000细胞毒性最大，可见多数细胞失去原有形态，并存在细胞裂解状态。RT-RCR和Western blot实验显示慢病毒转染RIP140-siRNA的肝脏库普氏细胞组无论在基因方面还是在蛋白质水平均明显低表达于lipofectamine 2000和罗氏试剂所转染的肝脏库普弗细胞组（P<0.05）。 结论 对于原代细胞肝脏库普弗细胞，在试剂转染方面，慢病毒转染方法可以达到理想的转染效率和较小的细胞毒性，且条件可控性与稳定性方面更加优越。 Abstract: Objective To compare the efficiency and cytotoxicity of different transfection reagents used in transfection of RIP140-siRNA into Kupffer cells to optimize the transfection conditions. Methods Kupffer cells were transfected with RIP140-siRNA labeled with GFP as the reporter gene using lipofectamine 2000, Roche reagent (X-treme GENE siRNA Transfection Reagent) and puro screening lentivirus (1.0�0 8 TU/mL) as the transfection reagents. The transfection effect was observed under a fluorescent inverted microscope, and laser scanning confocal microscopy was used to analyze RIP140 expression in trasnfected Kupffer cells. Flow cytometry was performed to detect cell apoptosis, and CCK-8 test was used to evaluate the cell proliferation inhibition. RT-RCR and Western blotting were performed to detect the expressions of RIP140 mRNA and protein in the trasnfected cells. Results Puro screening lentivirus yielded the highest cell transfection efficiency, which exceeded 90%, followed by Roche reagent and then by lipofectamine 2000. Flow cytometry and CCK-8 test showed that the cytotoxicity was the mildest with Roche reagent, moderate with lentivirus, and severe with lipofectamine 2000. The cells trasnfected with lentivirus showed a significantly lower RIP140 expression than cells trasnfected with lipofectamine 2000 and Roche reagent (P<0.05). Conclusion In Kupffer cells, lentivirus-mediated transfection, as compared with the other two trasnfection reagents, can achieve good transfection efficiency with a relativelty low cytotoxicity, and allows for better controllability and stability of the trasnfectiion conditions. 肝脏库普弗细胞 转染效率 细胞毒性 RIP140-siRNA 分类： 医学、药学 >> 基础医学 引用： ChinaXiv:201712.00709 (或此版本 ChinaXiv:201712.00709V1 ) doi:10.12074/201712.00709 CSTR:32003.36.ChinaXiv.201712.00709.V1 推荐引用方式： 李吉,刘作金.(2017).不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较.南方医科大学学报.[ChinaXiv:201712.00709] 版本历史 [V1] 2017-12-07 16:35:23 ChinaXiv:201712.00709V1 下载全文
玄幻
本书为王跃文所著的一部长篇历史小说，塑造了清朝康熙年间，以陈廷敬为主要代表的大臣群相，反映了一个特定历史境遇中特殊人物的人格、道德和行为的艰难选择。陈廷敬的处事为人之道，表现了当时知识分子所特有的一种高远理想与真正品格。以史为镜，述为官之道。再现三百多年前的官场风云，塑造满清宦海大臣群像。
灵异鬼怪
【综星铁】 【这不是单元故事，剧情是全书连贯的，all向】 封面是亲友画的女主，谢谢亲友！ 文案： 临潋不想死，生命垂危之际，她得到了药师的祝福。 好消息是：药师的祝福给了她死而复生的能力 坏消息是：阿哈掺和了一脚 死亡之后一切重来，临潋的生命立刻被刷新，除了心中发誓要追随一辈子的药师大人之外，其他的记忆都烟消云散。 ＊ 会写的角色如下： 砂金，真理，丹恒，星期日等（想到再加，且该顺序不一定，可能会后续调整） 注意： ①是all向，新感情线以女主的记忆刷新为起点 ②我尽力在不ooc的情况下做好饭，大家看得开心。如果看不开心想弃文也不必告诉我，毕竟这也只是一本免费小说（请大家不要对我太严苛了，拜托拜托）。 ③如果喜欢请不要养书，数据不好真的会把我养死TVT 这里留个位置，以后视情况添加
爽文
顺便帮忙宣传一下，胡歌主演新剧《十喜临门》。
扮猪吃虎
如若天下太平，那他必然只是天下芸芸众生中最为平常的那一个，但世间风云突起，家园被毁让他成为修仙者，世上浩劫让他成为一代宗师，而人类的危机，更让他成为天下间顶尖宗师和一大势力的掌控者，一步一步，踏上了巅峰，命运就这么一次又一次的把他推上了风尖浪口，而他则一次又一次的在冷酷与软弱，现实与躲避之间犹豫徘徊着，一次次的抉择让他将那份善良与软弱隐藏在心底，学会了现实、冷酷和牺牲，从本心上讲，兰州资源环境职业技术大学人罢了，虽然他读的书并不算太多
系统
一直以来，这本《客卿长老》都被苗疆各族视为至宝，由南诏王亲自收藏。
年下
炎阳真经》至刚至阳的内功，《坏了！病娇黑道大小姐赖上我》亦是一等一的刚猛招式。
哲学
（多女主，不无脑） 楚玦的职场困境：被基佬同事陷害，被纪律小组约谈，被塞进一个叫“智识之桥”的坑爹项目。 楚玦的人生困境：他发现自己出现在仙舟联盟的追杀令上，排名还挺靠前。 楚玦的终极困境：那些在模拟里被他“用过心”的女人们，好像都追到现实中来了。 【系统提示：您已完成“救世主”结局、“公司大人物”结局、“血洗天下”、“恨海情天”……结局。】 【系统提示：请选择您的最终身份。】 【A. 继续当公司P35打工仔 B. 被仙舟联盟追杀 C. 被模拟里的女人们追 D. ……】 楚玦：我选D！ 【D：以上全部】 系统提示：您已进入地狱难度。 楚玦：……我能不能重选？ 系统：不能。祝您游戏愉快。 太傻吊了，有没有感人风格？ “楚玦。香囊或是流苏挂坠……你喜欢吗？” “教官，可以再教我一次握剑的方式吗？” “你曾经问过我，五百年后你还会有什么…答案是除了最想要的那个存在，我好像什么都有了…” “你说得对，谁都可以是拉曼查。但你忘了告诉我，拉曼查的风车，是会杀人的。” “……最终，最恨不过是恨你不爱我。”
现代言情
楚河有点脑壳痛，来到这方蓝星平行世界，自己好兄弟到处宣传自己是蜀山传人！ 可我真不是啊。 恰逢，灵气复苏，天下大乱。 蜀山传承系统，激活！ 这下楚河真成了蜀山弟子了。 得，这下更说不清了。 “哎哎，我这真不是丹药，是……新型药丸！” “召唤雷电？不！我携带了便携引雷针！” “御剑术？你别闹，我用磁铁弄得！”
机甲
日万更
呃。。。乱了。。。
有困难找警察，不知道有没有警察叔叔进这个游戏，进来以后会发现工作做不完，根本做不完…
好看＼(^o^)／
好看的总是忘了打分
好诡异哪，19啊，用宝树童鞋嘀话，你绝对是自虐又虐人。。。