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不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较 作者： 李吉 1 刘作金 2 作者单位： 1. （1）重庆医科大学第二临床学院，重庆 400016；（2）重庆医科大学附属第二医院肝胆外科，重庆 400010 提交时间： 2017-12-07 摘要: 目的 对比不同的转染试剂转染RIP140-siRNA至肝脏库普弗细胞的转染效率及它们对肝脏库普弗细胞的细胞毒性，从而寻找出最佳的肝脏库普弗细胞试剂转染方法和条件。 方法 以肝脏库普弗细胞为研究对象，以绿色荧光蛋白（GFP）标记的RIP140-siRNA为报告基因（reporter gene），采用lipofectamine 2000，罗氏试剂（X-treme GENE siRNA Transfection Reagent）及嘌呤霉素筛选的慢病毒（1.0×10 8 TU/mL）作为转染试剂，荧光倒置显微镜下观察细胞转染效果，激光扫描共聚焦显微镜分析不同试剂转染后细胞RIP140的表达，流式细胞术检测各组细胞凋亡，CCK-8检测各组细胞增殖抑制情况。收集细胞并进行裂解，提取细胞RNA与蛋白质，运用RT-RCR和Western blot实验法检测转染RIP140-siRNA后的基因及蛋白质表达情况。结果 对于肝脏库普弗细胞而言，在转染效率方面：嘌呤霉素筛选的慢病毒转染效率最高，可达90%以上；罗氏试剂其次；lipofectamine2000效果最差。在试剂的细胞毒性方面：流式细胞术及CCK-8检测结果显示罗氏试剂的细胞毒性最小，细胞可见其原有形态；慢病毒其次；lipofectamine 2000细胞毒性最大，可见多数细胞失去原有形态，并存在细胞裂解状态。RT-RCR和Western blot实验显示慢病毒转染RIP140-siRNA的肝脏库普氏细胞组无论在基因方面还是在蛋白质水平均明显低表达于lipofectamine 2000和罗氏试剂所转染的肝脏库普弗细胞组（P<0.05）。 结论 对于原代细胞肝脏库普弗细胞，在试剂转染方面，慢病毒转染方法可以达到理想的转染效率和较小的细胞毒性，且条件可控性与稳定性方面更加优越。 Abstract: Objective To compare the efficiency and cytotoxicity of different transfection reagents used in transfection of RIP140-siRNA into Kupffer cells to optimize the transfection conditions. Methods Kupffer cells were transfected with RIP140-siRNA labeled with GFP as the reporter gene using lipofectamine 2000, Roche reagent (X-treme GENE siRNA Transfection Reagent) and puro screening lentivirus (1.0�0 8 TU/mL) as the transfection reagents. The transfection effect was observed under a fluorescent inverted microscope, and laser scanning confocal microscopy was used to analyze RIP140 expression in trasnfected Kupffer cells. Flow cytometry was performed to detect cell apoptosis, and CCK-8 test was used to evaluate the cell proliferation inhibition. RT-RCR and Western blotting were performed to detect the expressions of RIP140 mRNA and protein in the trasnfected cells. Results Puro screening lentivirus yielded the highest cell transfection efficiency, which exceeded 90%, followed by Roche reagent and then by lipofectamine 2000. Flow cytometry and CCK-8 test showed that the cytotoxicity was the mildest with Roche reagent, moderate with lentivirus, and severe with lipofectamine 2000. The cells trasnfected with lentivirus showed a significantly lower RIP140 expression than cells trasnfected with lipofectamine 2000 and Roche reagent (P<0.05). Conclusion In Kupffer cells, lentivirus-mediated transfection, as compared with the other two trasnfection reagents, can achieve good transfection efficiency with a relativelty low cytotoxicity, and allows for better controllability and stability of the trasnfectiion conditions. 肝脏库普弗细胞 转染效率 细胞毒性 RIP140-siRNA 分类： 医学、药学 >> 基础医学 引用： ChinaXiv:201712.00709 (或此版本 ChinaXiv:201712.00709V1 ) doi:10.12074/201712.00709 CSTR:32003.36.ChinaXiv.201712.00709.V1 推荐引用方式： 李吉,刘作金.(2017).不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较.南方医科大学学报.[ChinaXiv:201712.00709] 版本历史 [V1] 2017-12-07 16:35:23 ChinaXiv:201712.00709V1 下载全文

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1v1,天生无情丝任务人×一见钟情美强惨妖皇】 穿越无数位面，系统要让松萝亲手杀了祸乱三界的妖皇才可归家。 可怕的是妖皇不好惹，稍不留神就有可能被他杀掉。 好消息：妖皇不杀她。 坏消息：要折磨她！ 松萝列举一下的证据： 1.妖皇将她捆在他身边，要时常感受来自灵界的刺杀。 2.打扫珍宝殿，去洗衣阁洗衣，为他研墨等等。 3.试炼之约他的威胁——不许告诉别人他的身份，否则就si。 4.最最最重要的一点，妖皇总是动不动就脸黑，臭脸怪！ ...旁人皆看透藤岁檀满心满眼都是她，唯有松萝满心戒备，只记着杀他的主线。 “木头。” 松萝：？是在叫她吗？ 经历生死后。 系统追问她心动与否，她冷声反问：想杀了他，算特殊情愫吗？ 藏在暗处听尽她与系统心声的妖皇，龙心寸寸碎裂，自此开启单向心碎追妻路。 世人皆知妖皇的淡薄狠戾，鲜少有人知道他不堪的过往。 三百年近乎折磨的痛苦终于换来了少女的到来。 松萝不知，藤岁檀但凡一动心便会要忍受锥心刺骨的痛。 比起这些痛，在得知她还要杀他时，生不如死。

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【天灾召唤师】 李无妄觉醒强职业召唤师，却是弱类自然召唤师，开局只能召唤一颗小石头。 但他却觉醒了唯一天赋，【灾变】！ 于是…… 【石头召唤—陨石召唤—行星撞击！】 【弱电召唤—雷暴召唤—灭世雷劫！】 【水滴召唤—海啸召唤—怒海狂涛！】 【微风召唤—风暴召唤—风暴之眼！】 【……】 一个个弱鸡召唤，灾变成了灭世天灾！ 什么妖魔鬼怪地狱副本，一击灭之！ 当别人还在吭哧吭哧刷级时，李无妄早已进阶成神。 当别人还在为装备爆率苦恼时，李无妄早已满身神装。 当某天李无妄感到无聊时，全大陆都慌了……