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不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较 作者： 李吉 1 刘作金 2 作者单位： 1. （1）重庆医科大学第二临床学院，重庆 400016；（2）重庆医科大学附属第二医院肝胆外科，重庆 400010 提交时间： 2017-12-07 摘要: 目的 对比不同的转染试剂转染RIP140-siRNA至肝脏库普弗细胞的转染效率及它们对肝脏库普弗细胞的细胞毒性，从而寻找出最佳的肝脏库普弗细胞试剂转染方法和条件。 方法 以肝脏库普弗细胞为研究对象，以绿色荧光蛋白（GFP）标记的RIP140-siRNA为报告基因（reporter gene），采用lipofectamine 2000，罗氏试剂（X-treme GENE siRNA Transfection Reagent）及嘌呤霉素筛选的慢病毒（1.0×10 8 TU/mL）作为转染试剂，荧光倒置显微镜下观察细胞转染效果，激光扫描共聚焦显微镜分析不同试剂转染后细胞RIP140的表达，流式细胞术检测各组细胞凋亡，CCK-8检测各组细胞增殖抑制情况。收集细胞并进行裂解，提取细胞RNA与蛋白质，运用RT-RCR和Western blot实验法检测转染RIP140-siRNA后的基因及蛋白质表达情况。结果 对于肝脏库普弗细胞而言，在转染效率方面：嘌呤霉素筛选的慢病毒转染效率最高，可达90%以上；罗氏试剂其次；lipofectamine2000效果最差。在试剂的细胞毒性方面：流式细胞术及CCK-8检测结果显示罗氏试剂的细胞毒性最小，细胞可见其原有形态；慢病毒其次；lipofectamine 2000细胞毒性最大，可见多数细胞失去原有形态，并存在细胞裂解状态。RT-RCR和Western blot实验显示慢病毒转染RIP140-siRNA的肝脏库普氏细胞组无论在基因方面还是在蛋白质水平均明显低表达于lipofectamine 2000和罗氏试剂所转染的肝脏库普弗细胞组（P<0.05）。 结论 对于原代细胞肝脏库普弗细胞，在试剂转染方面，慢病毒转染方法可以达到理想的转染效率和较小的细胞毒性，且条件可控性与稳定性方面更加优越。 Abstract: Objective To compare the efficiency and cytotoxicity of different transfection reagents used in transfection of RIP140-siRNA into Kupffer cells to optimize the transfection conditions. Methods Kupffer cells were transfected with RIP140-siRNA labeled with GFP as the reporter gene using lipofectamine 2000, Roche reagent (X-treme GENE siRNA Transfection Reagent) and puro screening lentivirus (1.0�0 8 TU/mL) as the transfection reagents. The transfection effect was observed under a fluorescent inverted microscope, and laser scanning confocal microscopy was used to analyze RIP140 expression in trasnfected Kupffer cells. Flow cytometry was performed to detect cell apoptosis, and CCK-8 test was used to evaluate the cell proliferation inhibition. RT-RCR and Western blotting were performed to detect the expressions of RIP140 mRNA and protein in the trasnfected cells. Results Puro screening lentivirus yielded the highest cell transfection efficiency, which exceeded 90%, followed by Roche reagent and then by lipofectamine 2000. Flow cytometry and CCK-8 test showed that the cytotoxicity was the mildest with Roche reagent, moderate with lentivirus, and severe with lipofectamine 2000. The cells trasnfected with lentivirus showed a significantly lower RIP140 expression than cells trasnfected with lipofectamine 2000 and Roche reagent (P<0.05). Conclusion In Kupffer cells, lentivirus-mediated transfection, as compared with the other two trasnfection reagents, can achieve good transfection efficiency with a relativelty low cytotoxicity, and allows for better controllability and stability of the trasnfectiion conditions. 肝脏库普弗细胞 转染效率 细胞毒性 RIP140-siRNA 分类： 医学、药学 >> 基础医学 引用： ChinaXiv:201712.00709 (或此版本 ChinaXiv:201712.00709V1 ) doi:10.12074/201712.00709 CSTR:32003.36.ChinaXiv.201712.00709.V1 推荐引用方式： 李吉,刘作金.(2017).不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较.南方医科大学学报.[ChinaXiv:201712.00709] 版本历史 [V1] 2017-12-07 16:35:23 ChinaXiv:201712.00709V1 下载全文

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赵行舟是在殡仪馆里长大的，浑身上下阴气滔滔，见惯了各种光怪陆离的事，因为他们赵家就是传说中的镇馆人。 后来有一天赵行舟才知道，除了他这个镇馆以外，殡仪馆里看门的老大爷，火化班的班长，开灵车的司机甚至所长，哪一个都不是简单的货色。 整个殡仪馆上下都充斥着浓郁的神秘兮兮的色彩，颇有一种八仙过海各显神通的氛围。 直到那天来了一个五弊三缺，天人五衰的阴阳先生，一切从此就发生了改变。

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高程的尸体被烧成虚无之后，他尸体所在的位置出现了一面黑色小旗子。 萧玉一接触到小旗子，他的脸色就阴沉了起来。 “主上，怎么了？” “他竟然在这面旗子中封印了近千冤鬼，真是该死至极。” 冤鬼若是在七七四十九天之内没化成恶鬼的话，冤鬼就会因为抵受不住轮回召唤而进入轮回，因此，世间的恶鬼不少，可是世间的冤鬼却不多。 萧玉可以肯定，封印在这面旗子中的那些冤鬼的生身大都死在高程的手上。 “林兄，你接着炼剑，我到外面去了。” 不等林北文回话，萧玉转身往外走去。 来到石缝口，萧玉先四下观察了一下，然后就低声念起了《灵泉空间：我在异世带球逃荒》。 这面小旗子对封印在里面的冤鬼的束缚力虽然不弱，可是在无人操控的情况下，萧玉还是可以以经文配合福德之光引渡那些冤鬼进入轮回。 淮阴山不是什么灵山，来淮阴山的修炼者一向都很少。 在高程被萧玉杀死之后，就再也没有人来打搅他们了。 二十三天的时间过后，林北文满脸兴奋的拿着一把透着幽光的黑剑从石缝内走到了萧玉身边。 此时，萧玉面前黑色小旗子已经编成了灰色。 抬眼对着满脸兴奋的林北文笑着点点头，萧玉就又将注意力放到了面前的小旗子上。 这小旗子也不知道被高程炼制了多长时间，里面竟然孕育出了一只十分凶悍的神鬼。 萧玉的福德之光可以轻松的将普通的冤鬼引渡如轮回，对付起这只凶悍的神鬼却十分的困难。 现在有林北文站在他身边，萧玉就将全部的注意力放在了度化这只神鬼上。 随着时间的推移，一只头上长着双角的神鬼出现在了小旗之上。

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