云鼎登录网站

不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较 作者： 李吉 1 刘作金 2 作者单位： 1. （1）重庆医科大学第二临床学院，重庆 400016；（2）重庆医科大学附属第二医院肝胆外科，重庆 400010 提交时间： 2017-12-07 摘要: 目的 对比不同的转染试剂转染RIP140-siRNA至肝脏库普弗细胞的转染效率及它们对肝脏库普弗细胞的细胞毒性，从而寻找出最佳的肝脏库普弗细胞试剂转染方法和条件。 方法 以肝脏库普弗细胞为研究对象，以绿色荧光蛋白（GFP）标记的RIP140-siRNA为报告基因（reporter gene），采用lipofectamine 2000，罗氏试剂（X-treme GENE siRNA Transfection Reagent）及嘌呤霉素筛选的慢病毒（1.0×10 8 TU/mL）作为转染试剂，荧光倒置显微镜下观察细胞转染效果，激光扫描共聚焦显微镜分析不同试剂转染后细胞RIP140的表达，流式细胞术检测各组细胞凋亡，CCK-8检测各组细胞增殖抑制情况。收集细胞并进行裂解，提取细胞RNA与蛋白质，运用RT-RCR和Western blot实验法检测转染RIP140-siRNA后的基因及蛋白质表达情况。结果 对于肝脏库普弗细胞而言，在转染效率方面：嘌呤霉素筛选的慢病毒转染效率最高，可达90%以上；罗氏试剂其次；lipofectamine2000效果最差。在试剂的细胞毒性方面：流式细胞术及CCK-8检测结果显示罗氏试剂的细胞毒性最小，细胞可见其原有形态；慢病毒其次；lipofectamine 2000细胞毒性最大，可见多数细胞失去原有形态，并存在细胞裂解状态。RT-RCR和Western blot实验显示慢病毒转染RIP140-siRNA的肝脏库普氏细胞组无论在基因方面还是在蛋白质水平均明显低表达于lipofectamine 2000和罗氏试剂所转染的肝脏库普弗细胞组（P<0.05）。 结论 对于原代细胞肝脏库普弗细胞，在试剂转染方面，慢病毒转染方法可以达到理想的转染效率和较小的细胞毒性，且条件可控性与稳定性方面更加优越。 Abstract: Objective To compare the efficiency and cytotoxicity of different transfection reagents used in transfection of RIP140-siRNA into Kupffer cells to optimize the transfection conditions. Methods Kupffer cells were transfected with RIP140-siRNA labeled with GFP as the reporter gene using lipofectamine 2000, Roche reagent (X-treme GENE siRNA Transfection Reagent) and puro screening lentivirus (1.0�0 8 TU/mL) as the transfection reagents. The transfection effect was observed under a fluorescent inverted microscope, and laser scanning confocal microscopy was used to analyze RIP140 expression in trasnfected Kupffer cells. Flow cytometry was performed to detect cell apoptosis, and CCK-8 test was used to evaluate the cell proliferation inhibition. RT-RCR and Western blotting were performed to detect the expressions of RIP140 mRNA and protein in the trasnfected cells. Results Puro screening lentivirus yielded the highest cell transfection efficiency, which exceeded 90%, followed by Roche reagent and then by lipofectamine 2000. Flow cytometry and CCK-8 test showed that the cytotoxicity was the mildest with Roche reagent, moderate with lentivirus, and severe with lipofectamine 2000. The cells trasnfected with lentivirus showed a significantly lower RIP140 expression than cells trasnfected with lipofectamine 2000 and Roche reagent (P<0.05). Conclusion In Kupffer cells, lentivirus-mediated transfection, as compared with the other two trasnfection reagents, can achieve good transfection efficiency with a relativelty low cytotoxicity, and allows for better controllability and stability of the trasnfectiion conditions. 肝脏库普弗细胞 转染效率 细胞毒性 RIP140-siRNA 分类： 医学、药学 >> 基础医学 引用： ChinaXiv:201712.00709 (或此版本 ChinaXiv:201712.00709V1 ) doi:10.12074/201712.00709 CSTR:32003.36.ChinaXiv.201712.00709.V1 推荐引用方式： 李吉,刘作金.(2017).不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较.南方医科大学学报.[ChinaXiv:201712.00709] 版本历史 [V1] 2017-12-07 16:35:23 ChinaXiv:201712.00709V1 下载全文

我证明，吃了唐僧肉真的可以长生不老。 然后我在人间游荡，捡到一个英俊柔弱的吸血鬼。 一把血一把蒜，喂养了他五百年。 结果他却向我提出分手。 那么请问，他是不给我面子，还是不给唐僧面子？

如果不是要崩溃的话，这个先天元胎，完全可以进化成为一个强大的生灵，就像是远古凶兽那样，兰州资源环境职业技术大学宇宙。

崔折妩穿成了疯批暴君的白月光。坏消息：原主背刺过暴君，原身也不是女主，身怀宫斗系统的气运之女和恨他入骨的乖戾暴君都想把她弄死。好消息：她有金手指，可以拉暴君共梦！崔折妩摩拳擦掌，潜入梦中救赎他悲惨的曾经。暴君从一开始的神经质、怀疑，到后来逐渐沉醉，整日回味。直到一次刺杀，崔折妩路过现场，条件反射的扑上去挡刀。暴君看着那熟悉的背影，凄美的姿态、令人肝肠寸断的对白，眼眶洇红，颤

【杀伐果断】【单女主】【不压实力】【言出法随系统超燃】 九州将倾，妖邪当道，神佛隐退，人间炼狱！ 面傀夺舍，水祟抢婴，纸轿勾魂，墨符噬主，布偶食念，镜妖摄形…… 妖邪遍地，无一人能独善其身！ 林衍穿越而来，恰逢身死之际，幸得破旧道袍傍身，言出法随系统临世！ 言发敕令镇妖邪，人信服则法威增，斩妖得机缘，道力一日千里！ 本只想靠着言出法随苟全性命，却不料斩水祟一战成名，碎面傀威震乡里，焚纸轿名动九州，不知不觉竟成了天下百姓的希望！ 林衍苦不堪言：贫道只想自保，真不想威震九州啊！ 可妖邪不除，人间不宁，既然无人敢站出，那便由我踏碎妖邪，以言出法随定九州，以实力护苍生！ 神佛不渡人间苦，贫道便为人间主！

哥哥们全都偏心假千金？林泷卖掉三份兄妹情，激活了“万物交易系统”！假千金假惺惺地说，宁肯自己的腿被截肢，也希望林泷的腿好起来？林泷拿出一纸交易合同，满足她的愿望！凤凰男父亲出轨？林泷买走母亲的旺夫运，带着母亲离婚，让他追悔莫及！假千金仰慕的豪门少主？林泷拿出一张卖身契，让他为自己鞍前马后！……金钱、寿命、健康、气运、感情、天赋、灵魂……只要林泷递出一纸合同，万物皆可交易！垂垂老矣的富豪，可以用十亿买一年寿命！执迷不悟的赌徒，耗尽一生寿命换取百万赌资，输得个人财两空！大山里养出七个优秀儿子的博士妈妈？卖掉子嗣缘，换自己光芒璀璨的人生！觉得女人来钱快的单身汉？换个性别看一看！高考七百分，也可以换七百万！普通人困扰的桃花运，是糊咖爆火的秘诀！精神病的阴阳眼，是玄门子弟梦寐以求！……林泷：什么，你说我开黑店？可是零差评呀！

【气运逆天+随身老登+资质平平+开局杂役处+典+孝+侥幸而已＋十年成仙】 入门第一年。 王耀你筑基了？进境颇为迅速啊。 王耀：侥幸而已。 入门第二年。 哎？王耀你怎么金丹了？ 王耀：运气好罢了。 入门三年。 卧槽！元婴？你元婴了啊！ 王耀：侥幸而已。 …… 入门第十年。 王耀你这就成仙了吗！你到底怎么修炼的？！ 王耀：哎呀，侥幸，侥幸而已啊。

修仙界散财仙子，第三次结丹失败，被雷给劈到星际，穿成被豪门赶出来的假千金。曾经的修仙界大小姐，如今变成穷光蛋，刚来就被房东赶走，还差点儿饿死街头。王也瘪了瘪嘴，虎落平阳被犬欺！咦，这里的世界怎么也有怪物？哈哈哈，天助我也，她王也没其他的本事，杀怪最在行！五校联赛，实战演习，星际战斗。多年后，王也和队友们出现在海之渊，看着那熟悉的六芒星阵法……

她是二十四世纪神医，一支银针，活死人，肉白骨。一夕穿越，成为王府人人喊打的大小姐。没有戒灵、骄横无能，身为王府嫡脉却被欺上门来？ 本是天之骄子，岂容尔等放肆！银针在手，天下我有！天玄地宝尽在她手，绝世功法信手拈来。叫你知道什么是打脸！神医到处，魂断九霄。不曾想，却救起了一只跟屁虫。 他绝色妖异，手段狠辣，却对这个偶然救他一命的小家伙，情有独钟。 “我们不熟。”某神医横眉冷对。

陆承光抱着四枚一等功勋章跪在军区门口，水泥地冰冷刺骨。 “爸爸战死边疆，妈妈抗疫牺牲，哥哥缉毒殉职，姐姐与敌机同归于尽。” 怀里的妹妹突然挣开他，举起姐姐的勋章尖叫：“房子没了！他们推了我们的家！” 哨兵手中钢枪哐当坠地。 十年后他重启哥哥的警号，富豪在法庭上咆哮：“几个死人勋章算什么！” 陆承光抚过胸前警号：“PC-0719重启，现以谋杀烈士家属未遂罪逮捕你。” 身后旁听席，穿空军蓝的妹妹打开笔记本电脑，屏幕亮起跨国洗钱证据链。